ইন্ডিয়ান কাউন্সিল অফ মেডিকাল রিসার্চ (ICMR) এর স্বীকৃতি পেলে বাজারে আসতে চলেছে COVID 19 সনাক্তকরণ আর এক সহজ ও দ্রুত উপায়, Chitra GENELAMP-N. তিরুবনন্তপুরমের শ্রী চিত্রা ইনস্টিটিউট ফর মেডিকেল সায়েন্সেস অ্যান্ড টেকনোলজির একটি দল ডঃ অনুপ ঠেক্কুভীত্তিল এর নেতৃত্বে RT-LAMP (Reverse Transcription Loop Mediated Isothermal Amplification) রাসায়নিক বিক্রিয়া কে কাজে লাগিয়ে এই দ্রুত সনাক্তিকরণ কিট টি তৈরি করতে সক্ষম হয়েছে, যা সর্বাধিক ২ ঘণ্টা র মধ্যে এর মধ্যে SARS Cov2 ভাইরাস এর N-জিন টির উপস্থিতি রোগী র অনুনাসিক বা লালারস থেকে সনাক্ত করতে সক্ষম হবে। এই সনাক্তিকরণ প্রক্রিয়া র জন্যে যে যন্ত্রাদি দরকার তার মুল্য হবে আয়াত্বের মধ্যে, সাথে সাথে এই পরীক্ষার উপাদান গুলি ও খুব খরচ সাপেক্ষ নয়। ডিপার্টমেন্ট অফ সাইন্স এন্ড টেকনোলজি র অধীনের এই প্রতিষ্ঠানের গবেষক ডঃ অনুপ আশাবাদী যে রোগী পিছু মাত্র ১০০০ টাকায় এই পরীক্ষা করা সম্ভব হবে। যা এখন বাজার চলতি পরীক্ষার তুলনায় বেশ সস্তা এবং দ্রুত।
শ্রী চিত্রা ইনস্টিটিউট ফর মেডিকেল সায়েন্সেস অ্যান্ড টেকনোলজির মলিকুলার বাওলজি ডিপারট্মেন্ট এ গত কয়েক বছর ধরে যক্ষা রোগ এর অনুজীবি নিরধারনের জন্যে RT-LAMP বিক্রিয়া কে কাজে লাগিয়ে সনাক্তকরণ পদ্ধতি তৈরি র গবেষণা চলছে। তাই যখন COVID 19 বিশ্ব জুড়ে মহামারী আকার ধারন করল তখন ইতিমধ্যে গড়ে তোলা যন্ত্রাংশ ব্যবহার করে মাত্র তিন সপ্তাহের মধ্যে ডঃ অনুপ এর নেতৃত্বে গবেষকরা অত্যন্ত তৎপরতার র সাথে COVID 19 সনাক্তকরণ কিট টি প্রস্তুত করেন। ইন্ডিয়ান কাউন্সিল অফ মেডিকেল রিসার্চ (ICMR) সম্মতি তে ন্যাশনাল ইনস্টিটিউট অফ ভাইরোলজি , আলাপুঝায় (NVI) পরীক্ষাগুলির বৈধতা বিচার করেছে।
এখনও পর্যন্ত COVID19 অসুখ এর অনুজীবি SARS-CoV-2 ভাইরাস এর সক্রিয় উপস্থিতি নির্ধারণ এর সব চেয়ে ভরসা জনক উপায় হল রিয়াল টাইম আর টি -পি সি আর ( real time RT PCR), যা সময় এবং ব্যয় সাপেক্ষ। শ্রী চিত্রা ইনস্টিটিউট এর তৈরি ডায়াগনস্টিক কিট টি ভাইরাল জিন এর উপস্থিতি আক্রান্ত রোগী র পরিশোধিত RNA থেকে মাত্র ১০ মিনিট এর মধ্যে নির্ধারণ পারবে, বাকী সময় লাগবে RNA পরিশোধন ও বিক্রিয়া র প্রস্তুতিতে। আশা করা যায় এই কিটের লাইসেন্স কেন্দ্রীয় ড্রাগস স্ট্যান্ডার্ড কন্ট্রোল অর্গানাইজেশন (CDSCO) দ্বারা অনুমোদিত হতে চলেছে.
Loop-mediated isothermal AMPlification বা LAMP হল একটি একক পাত্র, সমতাপীক বিক্রিয়া যার বিক্রিয়া প্রণালিটি কিন্তু বেশ জটিল। এখানে চার প্রকার প্রাইমার এর ব্যবহার করা হয়, যা সমতাপীয় বা আইসোথারমাল অবস্থায় (৬০ ০-৬৫ ০ সে) নির্বাচিত জিন বা টারগেট ডিএনএ এর ছয়টি স্বতন্ত্র অঞ্চল চিহ্নিত করার জন্য বিশেষভাবে নকশা করা হয়, সাথে থাকে এক বিশেষ বৈশিষ্ঠ্য এর ডিএনএ পলিমারেস ( Bst DNA polymerase) যা সমতাপীয় অবস্থায় প্রাইমার যুক্ত বা প্রতিস্থাপিত হয়ে বিযুক্ত হওয়া দুটি কাজ এ অত্যন্ত তৎপরতা র সাথে করে থাকে, সাথে সাথে ডিএনএ সংশ্লেষণ কাজ টি তো আছেই। মনে রাখতে হবে প্রচলিত পিসিআর (PCR) বিক্রিয়া তে এই ধাপ গুলি বিভিন্ন তাপমাত্রায় নির্বাহ করা হয়। LAMP এর জটিল বিক্রিয়া টি চলা কালীন লক্ষ্য বা টার্গেট ডিএনএ কে মাঝ খানে রেখে প্রচুর স্টেম-লুপ ( মাঝে ডাঁটা ও দুধারের স্ট্রান্ড টি ভাঁজ খেয়ে অন্তরমুখী হয় যা পরবর্তী ধাপে প্রাইমার এর মতন কাজ করে) - ধরনের ডিএনএ তৈরি হয় যা ক্রম বিক্রিয়া টি যখন চলতে থাকে তখন পরস্পর এর সাথে জুড়ে লম্বা ডিএনএ সুত্র সংশ্লেষ করে। LAMP এর উৎপাদিত চূড়ান্ত ধাপে পাওয়া যায় ডাবল স্ট্র্যান্ডড স্টেম-লুপ ডিএনএ যার মধ্যে থাকে বেশ কয়েকটি লক্ষ্য ডিএনএ এর পুনরাবৃত্তি এবং একাধিক লুপের সাথে ফুলকপির মতো গোল গোল কাঠামো। এই ডিএনএ জেল-ইলেক্ট্রফোরেসিস বা SYBR গ্রীন ডিএনএ রঞ্জক এর মাধ্যমে ও নির্ধারণ করা যায়। LAMP বিক্রিয়া তে প্রচুর পরিমাণে বিভিন্ন দৈর্ঘ্য এর স্টেম-লুপ ওলা ডিএনএ উৎপন্ন (>১০ µg) হয় আর সাথে তৈরি হয় প্রচুর পরিমাণে উপজাত ম্যাগ্নেসিয়ম পাইরোফসফেট যা সাদা অধক্ষেপ হিসেবে বিক্রিয়া মাধ্যম এর অসচ্ছতা বৃদ্ধি করে। ৪০০ nm এ আলকবিচ্ছুরণ এর মাত্রা থেকেও বিক্রিয়া চলাকালীন অসচ্ছতা বৃদ্ধি থেকে বিক্রিয়া-র আগ্রগতি ও সমাপ্তি পরিমাপ করা যায়। যখন এই বিক্রিয়া টি আরএনএ (RNA) এর জন্যে করা হয় তাকে বলা হয় RT-LAMP, যেখানে LAMP এর আগে একটি রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্সন বিক্রিয়া ধাপ জুড়ে দেওয়া হয় যেখানে সমতাপীক (৬০ ০-৬৫ ০ সে) অবস্থায় ভাইরাস আরএনএ (RNA) এর কমপ্লিমেন্টারি ডিএনএ বা cDNA সংশ্লেষিত হয়।
RT-LAMP এর অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ ধাপ হল প্রাইমার নকশা বা (primer design) যা ৬০ ০-৬৫ ০ সে তাপমানে সঠিক ভাবে লক্ষ্য ডিএনএ তে জুড়তে পারে। লক্ষ্য ডিএনএ এর স্ট্রান্ড টির দৈর্ঘ্য যেন ১২০-১৬০ বেস হয় এবং সেখানে কোন গঠনগত ভাঁজ না থাকা ই বাঞ্ছনীয়। মনে রাখতে হবে এই বিক্রিয়া তে দুই থেকে তিন জোড়া প্রাইমার দরকার হয় সব কটি র নকশা খুব গুরুত্ব পূর্ণ।
প্রচলিত পিসিআর এ এক জোড়া প্রাইমার ব্যবহৃত হয় এবং বিক্রিয়া র বিভিন্ন্ ধাপ এ তাপচক্রে (৯৫ ০সে, ৫৫ ০সে, ৭২ ০সে)-র বিভিন্ন তাপমাত্রায় হয়। উৎপাদিত ডিএনএ এর দৈর্ঘ্য নির্দিষ্ট এবং অভিন্ন হয়। প্রচলিত পিসিআর এর সাহায্যে অনেক বেশী লম্বা ডিএনএ স্ট্রান্ড (১০০০ বেস +) নির্বাচন করতে পারা যায়।
শুধু মাত্র প্রাইমার নকশা ছাড়া বাকী সব ধাপ ই সহজে একটি রিয়াকসন টিউব এর মধ্যে ই একটি নির্দিষ্ট তাপমাত্রা য় নির্বাহ করা যায়। যেহেতু তাপচক্রে র দরকার হয়না তাই যন্ত্রাদি তৈরি করা ও খুব জটিল নয়। প্রয়োজনীয় তাপমাত্রা এত কম (৬৫ ০সে) যে একটি সাধারণ গরম জলের বাথ ব্যবহার করে প্রতিক্রিয়াটি সম্পন্ন করা যায়। ফ্লুরেসেন্ট রঞ্জক এর সাহায্যে খুব সহজেই উৎপাদিত ডিএনএ সনাক্ত করা সম্ভব। আধুনিক প্রযুক্তির সাহায্যে খুব সহজে ই নমুনা অনুযায়ী সনাক্তিকরণ সম্ভব। তাছাড়া RT LAMP খরচ অ সময় সাপেক্ষ্য না হবার আর একটি কারণ হল একেকবারে কম সংখ্যক নমুনা নিয়েও বিশ্লেষণ করতে অতিরিক্ত খরচ হয়না বা সময় অপব্যয় হয়না।
১ , এটি বিশ্বের প্রথম কয়েকটি নিশ্চিতকরণমূলক ডায়াগনস্টিক পরীক্ষা যা SARS-CoV-2 এর N- জিন কে সনাক্ত করে। (N জিন ভাইরাস এর নিউক্লিওপ্রোটিন কোড করে)।২, কিটটি N জিনের দুটি অঞ্চল সনাক্ত করতে পারে ,তাই ভাইরাল জিনের একটি অঞ্চল যদি বর্তমান প্রসারণের সময় পরিবর্তন বা mutation এর মধ্য দিয়ে যায় তবুও নির্ভুল ফলাফলের পাওয়া সম্ভব।৩, ত্রিশটি নমুনা একটি একক ব্যাচে একটি মেশিনে পরীক্ষা করা যেতে পারে এবং অপেক্ষাকৃত কম সময় সনাক্তকরণ সম্ভব তাই অপেক্ষার সময় উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পাবে। একটি মেশিনে একাধিক শিফটে প্রতিদিন প্রচুর পরিমাণে নমুনা পরীক্ষা করার অবকাশ থাকবে।৪, Chitra GENELAMP-N কিট এর থেকে পাওয়া ফলাফল প্রচলিত পিসিআর এর ফলের সাথে ১০০% সদৃশ এবং এই বৈধতা ন্যাশনাল ইনস্টিটিউট অফ ভাইরোলজি (NIV), আলাপুঝা নিশ্চিত করেছে।৫, RT-LAMP এর জন্যে RT PCR এর মতন কোন পরিশীলিত ব্যয়বহুল সরঞ্জামের প্রয়োজন নেই। শুধুমাত্র একটি ওয়াটার বাথ বা একটি এয়ার সারকুলেসন যন্ত্র যা সহজেই ৬০ ০ – ৬৫ ০ সে তাপমাত্রা বজায় রাখতে পারবে। বাকী সব যন্ত্রাংশ মিলে ৫ লক্ষ টাকা র বেশী খরচ হবেনা।
নির্মাণকারী গবেষক ডঃ অনুপের মতে সরকার এর অনুমতি আর আর্থিক অনুদানে জেলা হাসপাতাল এও এই যন্ত্র বসানো সম্ভব। যা শুধু COVID১৯ কেন আরও অনেক ভাইরাল ঘটিত রোগ নির্ণয় করতে ব্যবহার করা যাবে,সাথে লাগবে রোগ অনুযায়ী প্রাইমার কিট।
আশা করা যায় যদি আইসিএমআর (ICMR) এর নির্দেশিকা মেনে Chitra GENELAMP-N স্বীকৃতি লাভ করে তাহলে COVID 19 ভাইরাসের বিরুদ্ধে ভারতের লড়াইয়ে এগিয়ে যাওয়ার ক্ষেত্রে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা নিতে পারে।
This article on RT LAMP is a top quality informative article
বা: বেশ বোঝা যাওয়ার মত লেখা। ধন্যবাদ।
আবার অসংখ্য ধন্যবাদ ।
আফনে কিসু করেন আপা
বাঁচান আমাদিরকে
Pragati,
dhonyobad. Tumi Ei kaj e jukto seta bhalo laglo jene. Tumi Dr. Anoop ke shubhechha diyo.
Tobe Ei durdin taratari kata Khub joruri.
lekhika